Répertorie les bandes WB et leurs signification.
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lali
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choix de la souche pour un WB

Message par lali »

soc a écrit :la réponse de soc me semble avoir ça place ici, pour continuer la discussion.

Salut Patrick,

Voila une question qu'elle est bonne !!!

Il ne faut pas se focaliser sur le nombre de bandes mais sur la nature des bandes.

On sait très bien que certaines bandes sont très spécifiques comme l'emblématique VLSE ou l'OspC qui peut migrer entre 21 et 25 Kd ; d'autre le sont moins comme le p41 (et encore !!) ou les protéines de haut poids moléculaires.

Le nombre de bandes maximales visualisables dépend très étroitement du réactif utilisé et cela, c'est très important !! Il dépend notamment de la souche utilisée qui exprimera plus ou moins certaines protéines et il faut que cette souche soit vigoureuse cad que cette souche doit avoir un faible nombre de repiquage avant d'être utilisé comme antigène.

Ce n'est pas le nombre de bandes potentielles pouvant être détectées qui fait la qualité du réactif ni son prix !! Certains réactifs utilisent uniquement des antigènes recombinants et souvent peu (4-5) mais certains de ces réactifs sont très bon car les antigènes choisis sont très immunogènes et fortement dosés.

En conclusion, il n'y a pas de corrélation entre la qualité du réactifs, le nombre de protéines sur la membranes et le prix du réactif !!

Un autre monde : sur quels critères un blot est jugé positif ?

Très difficile ! Les critères sont différents en fonction des réactifs (nature de la souche) et de l'ancienneté du produit aussi ! Les critères actuels ont tendance à positiver un blot avec moins de protéines qu'auparavant mais certains sont vraiment très optimistes puisque pour certain, la Vlse suffit à positiver un blot ce qui est très discutable. D'une autre manière, c'est rare de trouver un blot avec uniquement une Vlse !!

voila pour certaines questions posées !!

J'avoue qu'en me relisant, je trouve cela pas très clai mais j'espère quand même que crtaines partie pourront éclaircir votre lanterne !!

Soc
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lali
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par lali »

Voilà plusieurs fois que j'efface, c'est trés compliqué en fait pour comprendre.

Le choix de la souche, disons des antigènes, il est choisi ou fabriqué au coup par coup par le labo faisant le test? une fois sur un animal.. une fois chimique...

ou cela n'a pas d'influence sur l'apparition des bandes (sans différence entre garinii, afzelii et burgdorferi,: ça,ce doit être une autre question??? )?
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par Sociando »

Lali,

l'antigène est soit un lysat d'une souche cultivée, soit un miste de proteines recombinantes ou de peptides de synthèse.

Les proteines du lysat sont séparées par électrophorèse sur un gel de polyacrylamide puis transférées par un courant électrique sur une membrane de nitrocellulose.

Pour les protéines recombinantes, soit c'est l'electrophorèse soit directement le dot (dépot) sur la membrane d'électrophorèse.

Concernant les variations antigéniques entre souches, elles existent, bien évidemment et peuvent être à l'origine de reconnaissance différente pour un sérum sur plusieurs réactifs !!

Soc
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par lali »

Un Wb sur le même serum ne peut être fait en même temps pour une borréliose et un HIV?

Et pourtant on va ressortir presque les mêmes proteines??
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par Sociando »

lali a écrit :Un Wb sur le même serum ne peut être fait en même temps pour une borréliose et un HIV?

Et pourtant on va ressortir presque les mêmes proteines??
Ouh la !!!!!!!!!!!!!

Lali, il ne faut pas tout mélanger !!

Il n'y a rien de commun entre une protéine de borrélia et une protéine du VIH qui pourrait avoir le même "poids" en les faisant migrer par électrophorèse. Le seul point commun entre ces deux protéines est leur distance de migration exprimée en Kd.

Je sens qu'il faudrait organiser un cours de généralité en biologie concernant les techniques utilisées et leur limite pour tout le monde !!

Soc
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dave
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par dave »

Sociando a écrit :Je sens qu'il faudrait organiser un cours de généralité en biologie concernant les techniques utilisées et leur limite pour tout le monde !!

Soc
Excellente idée :yeah, si t'arrivais à nous faire un pti topo résumé du comment du pourquoi les WB, avec une ou deux ptites images, ca serait great !
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lali
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Re: choix de la souche pour un WB

Message par lali »

Là c'est clair.
Elles ont le même poids.
mais comme elles n' ont pas la même origine ( puisque au départ antigène d'une bactérie borrélia et l'autre un virus, le VIH )

impossible de les comparer.

Encore plus clair
rien à voir entre la p41 de la borrélia et la p41 du VIH.
la p41 met en évidence la flagelle de la bactérie, et le VIH, je sais pas s'il y en a une à ce poids, de tête, je me souviens des plus lourdes dont la p120 ou p122,non?
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